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谷子及其根际土壤微生物群落对铬胁迫的响应机制
白雪, 李玉靖, 景秀清, 赵晓东, 畅莎莎, 荆韬羽, 刘晋汝, 赵鹏宇
植物生态学报    2023, 47 (3): 418-433.   DOI: 10.17521/cjpe.2022.0049
摘要   (555 HTML40 PDF(pc) (2044KB)(480)  

重金属铬(Cr)污染对农田中农作物产生毒害作用并破坏土壤微生物群落稳态, 但不同农作物及其根际土壤微生物群落对Cr胁迫的响应机制均有所差异。该研究在时间序列上分析Cr胁迫对谷子(正名: 粱, Setaria italica)长势、谷子差异表达基因(DEGs)的功能途径及土壤微生物群落结构和功能等方面的影响, 阐明谷子及土壤微生物群落的响应机制, 为Cr胁迫下的谷子生长及污染土壤的生态修复治理提供理论依据。基于室内盆栽实验, 以谷子幼苗和种植谷子的土壤为实验材料, 在Cr胁迫前(CK)及胁迫后6 h和6 d (Cr_6h、Cr_6d)的时间序列上分别进行样本采集, 同时测量幼苗生理性状指标及土壤理化指标。通过转录组分析, 研究Cr胁迫时间序列上谷子幼苗基因表达及所富集的功能途径的变化趋势; 通过高通量测序分析, 研究Cr胁迫时间序列上土壤微生物群落结构、物种多样性、群落功能的动态变化过程及与土壤理化性质的相关性。结果发现: 1)转录组分析结果表明Cr胁迫诱导基因表达上调(上调DEGs 54%); Gene Ontology (GO)富集分析表明DEGs在CK和Cr_6h、Cr_6h和Cr_6d样本对中与光合作用相关的基因的表达显著下调; 在Cr_6h和Cr_6d样本对中与防御和损伤调控相关的基因的表达显著上调, 细胞壁及细胞膜和细胞分裂相关基因的表达下调。2)高通量测序结果表明Cr胁迫时间序列上土壤细菌与真菌在门、属水平组成变化显著; 细菌群落α多样性呈现出由应激到稳定的阶段性变化特征(CK、Cr_6h和Cr_6d的Shannon多样性指数分别为6.09、5.93和6.05; Simpson多样性指数分别为0.006 8、0.007 8和0.006 8; Chao多样性指数分别为2 818.49、2 630.73和2 769.38), 而真菌群落α多样性显著下降(Shannon-Wiener多样性指数分别为4.17、3.81和3.23); 细菌与真菌群落的β多样性在Cr胁迫时间序列的分布差异显著。3)土壤理化性质与微生物群落相关性分析表明土壤理化因子与多种真菌群落显著相关, 而与细菌群落的关联关系较弱。结果表明Cr胁迫在时间序列上通过降低叶绿素含量、光系统活性并影响类囊体等结构组分显著抑制了谷子幼苗的光合作用过程, 通过下调细胞壁及微管相关组分基因表达抑制叶片细胞的增殖分化过程, 但同时激活了植物防御系统以降低自身所受的毒害作用。同时土壤细菌与真菌群落通过群落组成结构及多样性的变化来适应Cr胁迫, 二者在胁迫时间序列上的响应程度和策略均有所不同。



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图2 铬(Cr)胁迫时间序列上谷子叶片中的差异表达基因(DEGs)。A-C, CK、Cr_6h、Cr_6d处理中谷子叶片DEGs火山图。蓝点、红点、灰点分别代表下调、上调和无显著变化基因。D, 不同处理谷子叶片中的DEGs Venn图。E, Cr胁迫下谷子叶片中DEGs的GO注释分析。CK, 对照; Cr_6d, Cr胁迫6 d; Cr_6h; Cr胁迫6 h。FC, 差异表达倍数; pa, 矫正的p值。
正文中引用本图/表的段落
用软件R 4.1.2、SPSS 19.0及Excel 2010辅助数据分析与作图。利用单因素方差分析(ANOVA)评估Cr胁迫时间序列上土壤理化因子、植物生理指标及生物量、土壤中细菌与真菌群落的物种组成、多样性等; 通过火山图明确Cr胁迫时间序列上DEGs的上下调状况; 通过GO功能注释与富集分析明确DEGs功能表达差异; 利用Sobs指数、Shannon多样性指数等探究土壤微生物群落的α多样性; 利用非度量多维尺度分析(NMDS)对Cr胁迫后时间序列上土壤微生物群落的时空分布格局进行排序分析; 利用PICRUSt 2、FUNGuild功能预测, 划分对环境资源吸收与利用相似的类群。
使用DESeq2软件, 通过TPM法计算获得处理间DEGs, 并筛选DEGs绘制火山图(图2)。结果表明与CK相比, Cr_6h共3 906个DEGs (2 483个上调, 1 423个下调); Cr_6d共4 382个DEGs (1 927个上调, 2 455个下调); Cr_6d与Cr_6h相比有2 090个DEGs (1 156个上调, 934个下调), 说明参与谷子抗Cr胁迫的基因大多有时间差异性。随Cr胁迫时间增长, DEGs的数量增加, 在Cr_6d达到最大值, 且上调与下调的DEGs数量分别约占总数的54%、46%, 说明Cr胁迫提高了基因表达水平。此外3个处理样品中仅8.90%基因是共享的, 说明谷子幼苗叶片中仅8.90%的基因在Cr胁迫时间序列上持续响应。
GO功能注释结果(图2E)表明DEGs在3个处理中显著富集于BP中的代谢过程、细胞过程等, CC中的细胞组分与膜组分等, MF中的结合、催化活性、转运活性等。
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